MEIO 199 (EARLE)

DEFINIÇÃO: É uma mistura de sais enriquecidos com aminoácidos, vitaminas e outros componentes essenciais para o crescimento celular.

AÇÃO: Age como uma solução nutritiva em cultivo celular.

INDICAÇÃO: Destina-se a cultura de células humanas e de outros animais. Este meio é fornecido na forma líquida e em pó. Na forma em pó, ele tem a vantagem de se manter estável por mais de 24 meses se conservado bem fechado e em geladeira. Outra grande vantagem do meio em pó é a constância de resultados quando se programam culturas celulares a longo prazo, utilizando nesse caso um mesmo lote. O MEIO 199 por ser pobre em ácido fólico é mais utilizado para pesquisa do sítio frágil do cromosso X, além disso ele apresenta uma infinidade de vitaminas que facilitam o metabolismo celular.

VANTAGENS: Testado em pelo três linhagens diferentes, sendo sempre determinado o seu pH e osmolaridade, cada lote só é liberado se estiver dentro dos limites adequados, além de promover um ótimo crescimento celular.

CARACTERÍSTICAS FÍSICO-QUÍMICAS:

-Aspecto : pó róseo e homogêneo
-Tamanho das partículas: aproximadamente 20 microns
-Solubilidade:solução límpida na concentração de uso (1x)
-pH à 25oC (sem NaHCO3) : 4,12 + 0,5
-pH à 25oC (com NaHCO3) :7,40 + 0,5
-Osmolaridade (sem NaHCO3) : 250 + 5%
-Osmolaridade (com NaHCO3) : 290 + 5%

CONSERVAÇÃO: Estocar o meio em pó ou o preparado líquido entre 2 a 6oC. Se essas condições não forem mantidas poderão ser observadas alterações do tipo:

1. Mudança de cor
2. Granulações
3. Insolubilidade
4. Alteração de pH
5. Incapacidade de manter a integridade sob condições normais.

PREPARAÇÃO: O MEIO 199 em pó é extremamente higroscópico devendo ser protegido do meio ambiente. Não são recomendadas preparações de concentrações maiores que aquelas especificadas devido a grande possibilidade de formação de precipitados.

1. Medir aproximadamente 90% do volume a ser preparado de água tridestilada (15-20oC).
2. Adicionar lentamente o pó sob agitação constante. NÃO AQUEÇA A ÁGUA.
3. Depois que o pó estiver totalmente dissolvido, acrescentar por litro 2,2g de bicarbonato de sódio 5,6%.
4. Acrescentar antibióticos ou outras substâncias que julgar necessário.
5. Poder-se-á acertar o pH conforme o desejado, utilizando-se HCl 1N ou NaOH 0,1N, ou ainda gaseificando-se com CO2.

Completar o volume com água tridestilada e esterilizar por filtração em membranas de 0,22m, utilizando pressão positiva.

APRESENTAÇÃO : PÓ - Frascos com pó para preparo de 1, 10 e 50 litros.
LÍQUIDO - Frasco com 100 ou 500 ml.
CONSERVAÇÃO : 2 à 6oC
VALIDADE : 12 meses

COMPOSIÇÃO MEIO 199

SAIS ORGÂNICOS	mg/L	biotina	0,010
CaCl2H2O	265,00	calciferol	0,100
Fe(NO3)39H2O	0,72	pantotenato de cálcio	0,010
MgSO47H2O	200,00	cloreto de colina	0,500
KCL	400,00	ácido fólico	0,010
C2H3O2Na	50,00	inositol	0,050
NaCl	6.800,00	menadione	0,010
NaHCO3	2.200,00	ácido nicotinico	0,025
NaH2PO4.H2O	125,00	niacinamida	0,025
		ácido p-aminobenzóico	0,050
AMINOÁCIDOS	mg/L	piridoxal.HCL	0,025
L-alanina	25,00	piridoxina.HCL	0,025
L-arginina.HCL	70,00	riboflavina	0,010
L-ácido aspártico	30,00	tiamina.HCl	0,010
L-cisteína.HCL.H2O	0,11	acetato de retinol	0,140
L-cistina	26,00	fosfato de tocoferol Na	0.01
L-ácido glutâmico	75,00
L-glutamina	100,00	OUTROS COMPONENTES	mg/L
glicina	50,00	adenina sulfato	10,00
L-histidina.HCL.H2O	21,88	adenosina trifosfato -2 Na	1,00
hidroxiprolina	10,00	adenosina monofosfato -Na	0,20
L-isoleucina	20,00	colesterol	0,20
L-lisina.HCL	70,00	deoxiribose	0,50
L-fenilalanina	25,00	glicose	1000.00
L-leucina	60,00	glutathione	0,050
L-metionina	15,00	guanina.HCL	0,30
L-prolina	40,00	hipoxantina	0,30
L-serina	25,00	vermelho de fenol	20,00
L-treonina	30,00	ribose	0,50
L-triptofano	10,00	xantina Na	0.344
L-tirosina	57,70	timina	0,30
L-valina	25,00	tween80	20,00
		uracil	0,30
VITAMINAS	mg/L
ácido ascórbico	0,050